大黄鱼超低温冻存精子的DNA损伤的SCGE检测

论文发布时间：[2010-04-19] 范文大全编辑：Voive.net

所有作者：叶霆竺俊全朱艺峰

作者单位：宁波大学教育部应用海洋生物技术重点实验室

论文摘要：为了解超低温冻存对大黄鱼精子DNA损伤的影响，采用单细胞凝胶电泳（SCGE）法，检测了以５％–３０％DMSO为抗冻剂的超低温冻存的大黄鱼精子核DNA的损伤情况。实验中，对传统的碱性单细胞凝胶电泳法在铺胶、电泳条件等方面进行改进——使用普通玻片单层铺胶法，在１３０mA、１５V条件下电泳６０min，获得了清晰的电泳图（彗星图谱）。彗星图经CometScore １。５分析软件处理，获得彗星全长、尾长、彗星拖尾中DNA 的量占细胞总DNA量的比例等参数，并计算彗星率与损伤系数；参照Goerin（１９９５）的分级方法，将大黄鱼精子DNA损伤程度分为５级。结果表明，以５％、１０％、１５％、２０％DMSO为抗冻剂的冻精与鲜精的活力（激活力、运动时间与寿命）、彗星率及损伤系数差异不显著，而以２５％、３０％DMSO为抗冻剂的冻精与鲜精的活力、彗星率及损伤系数差异显著。冻精SCGE彗星率与抗冻剂DMSO浓度成正相关，冻精核DNA损伤程度随DMSO浓度升高而增大。鲜精与冻精核DNA损伤主要为Ⅰ级和Ⅱ级损伤，Ⅲ级损伤比例低，Ⅳ级损伤只存在于２５％与３０％DMSO为抗冻剂的冻精中，且比例低。分析认为，大黄鱼冻精DNA损伤的主要因素为抗冻剂的毒副作用。

关键词：大黄鱼精子超低温冻存 DNA损伤单细胞凝胶电泳

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