应用HPLC优化铜绿微囊藻胞内毒素提取方法的研究

论文发布时间：[2010-03-03] 范文大全编辑：Voive.net

所有作者：任晶王祥荣郝孟丽

作者单位：复旦大学环境科学与工程系

论文摘要：本文应用HPLC定量检测方法探讨了纯培养铜绿微囊藻９０５胞内藻毒素的提取和纯化过程，发现铜绿微囊藻９０５胞内主要存在Microcystin-LR (MCLR)毒素，并优化了冻融法结合超声破碎藻细胞，固相萃取(SPE)富集纯化毒素和HPLC定量分析的毒素提取方法。得出以下结论：１。 HPLC检测MCLR过程中，以７０％甲醇+０。０５％TFA为流动相，能使藻毒素MCLR 达到基线分离，目标峰的保留时间为１１。３min；２。冻融，超声和振荡等三种处理藻细胞的方式中，冻融＋超声的方式所得到的藻毒素约为冻融＋振荡方式的２～３倍左右；３。７５％甲醇提取藻毒素效率较高，分别为含０。０５％TFA的甲醇提取量的１１５％，为含０。１％TFA的甲醇提取量的１３２％，为５％乙酸提取量的１２６％，为纯水提取量的１１６％；４。１０％和２０％甲醇淋洗液不能有效的将杂质去除，导致纯度不够。４０％甲醇淋洗液在去除杂质的同时也将相当一部分藻毒素洗出，导致浓度偏低。鉴于对纯度和浓度的综合考虑，本实验选取了３０％的甲醇作为淋洗液的最优浓度；５。６０％甲醇+０。０５％TFA，７０％甲醇+０。０５％TFA，８０％甲醇+０。０５％TFA，１００％甲醇+０。０５％TFA洗脱液的对比试验表明：８０％甲醇+０。０５％TFA的洗脱效果最好，纯度最高。建立并优化了基于HPLC定量检测的铜绿微囊藻９０５胞内藻毒素MCLR提取条件：７５％甲醇为提取液，冻融+超声破碎藻细胞，Sulpeco C１８固相萃取柱富集纯化，３０％甲醇淋洗，流速约为２ml/min，８０％甲醇+０。０５％TFA洗脱，从而可以收集到比较纯的藻毒素。

关键词： HPLC 铜绿微囊藻 MCLR 提取方法固相萃取

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