糖尿病并发症相关基因醛糖还原酶的表达和纯化

论文发布时间：[2010-03-26] 范文大全编辑：Voive.net

所有作者：项军强蒋红亮张虹丁明赵辅昆

作者单位：浙江理工大学生命科学学院

论文摘要：Real-time PCR分析以葡萄糖终溶度５０mM培养肝癌细胞SMMC-７７２１，对醛糖还原酶mRNA有较高的线性相关性、扩增效率和特异性。经RT-PCR法获得醛糖还原酶cDNA，用高保真DNA聚合酶克隆并扩增含有醛糖还原酶的cDNA序列全长，获得目的基因与大肠杆菌表达载体pET２２b(+)连接，转化E．coli BL２１（DE３），IPTG诱导表达重组蛋白AR-(His)６，利用Ni-NTA琼脂糖亲和层析纯化获得 AR-(His)６，Western-blotting验证重组蛋白AR-(His)６能与His-Tag antibody或Human aldose reductase antibody产生免疫印迹反应。紫外分光光度法进行酶活检测，AR-(His)６的酶活性为０。１１１６U单位(U)，其比活力是５５８U/mg。为下一步建立用于筛选具有抑制醛糖还原酶活性的天然化合物的筛药模型，及开发有临床应用价值的ARIs，进而为预防和治疗糖尿病并发症的临床应用打下基础。

关键词：糖尿病并发症醛糖还原酶表达纯化

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