人内肥素的克隆表达

论文发布时间：[2010-02-02] 范文大全编辑：Voive.net

所有作者：刘新宇刘德敏孙颖张捷于德民

作者单位：天津医科大学代谢病医院

论文摘要：目的：构建内肥素的高效表达系统，以大量获得高纯度重组内肥素，为进一步研究内肥素奠定基础。材料与方法：自人大网膜脂肪组织中提取内脏脂肪组织总RNA，以之为模板通过RT-PCR的方法扩增人内肥素成熟肽编码基因。将编码人内肥素的基因片段克隆到表达载体pQE-３０Xa上，并转化入E。coli M１５[pREP４]，进行融合表达。经金属螯合亲和层析初步纯化蛋白后，经凝血因子Xa酶切处理，去除融合标签。对纯化后的内肥素进行活性鉴定。结果：表达的融合蛋白经SDS-PAGE和Western blot鉴定无误。蛋白表达条件经优化后，内肥素的表达量达到３００mg/L培养基，属于高效表达。目的蛋白只含有内肥素成熟肽序列，最终纯化后的内肥素纯度>９５％。测定内肥素与胰岛素受体的结合活性，证明实验得到的表达产物能与胰岛素受体结合，并具备一定的剂量依赖关系。结论：成功构建了内肥素的高效原核表达系统，高效表达的重组蛋白具有生物活性。

关键词：内肥素脂肪因子基因工程融合表达

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