基于黄瓜花叶病毒的病毒诱导沉默载体的构建及优化

论文发布时间：[2010-02-27] 范文大全编辑：Voive.net

所有作者：李超张震霄杜志游陈香陈集双

作者单位：浙江理工大学生物工程研究所

论文摘要：本研究构建了基于黄瓜花叶病毒Fny株系的病毒诱导基因沉默表达载体，并讨论了不同长度PDS插入片段及RNA２插入位点对沉默效果的影响。长９８bp到７４７bp的八氢番茄红素脱氢酶（PDS）cDNA片段和绿色荧光蛋白cDNA片段被克隆进Fny-CMV RNA２上的不同位点并连同Fny-CMV RNA１/３接种至本生烟。结果显示，除CMV-２４２０-PDS７４７外的重组病毒均能稳定遗传，而CMV-２４２０-PDS７４７中PDS插入序列突变缺失了约７００bp序列。类似的突变也发生在CMV-２６６０-PDS３５３、CMV-２４２０-GFP、CMV-２５４０-GFP和CMV-２６６０-GFP上。我们认为，这是因为３３００bp以上的重组RNA２长度可能超出了其病毒粒子包装和系统移动所允许的上限。半定量RT-PCR结果显示，插入片段在２００-５００bp之间时，病毒诱导的PDS沉默效率最高，PDS mRNA丰度降幅可达６０-７５％。光漂白现象可持续３５天以上，虽然程度明显减弱。杂交结果显示，病毒本身可成为VIGS有效靶标。GFP的沉默结果与PDS保持一致。相比TMV和PVX沉默载体，CMV沉默载体诱导时间更快(接种后６-７天)，病毒症状更轻，沉默效率相仿。

关键词：黄瓜花叶病毒病毒诱导基因沉默载体 PDS GFP

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