所有作者：吴焜 程璐 王琼 郝丽 陈晓光
作者单位：南方医科大学公共卫生与热带医学学院病原生物学系
论文摘要：目的 构建弓形虫可遗传及可诱导的RNAi载体系统，为弓形虫基因功能研究提供工具。方法 通过PCR和酶切连接，首先构建弓形虫主要表面抗原１(SAG１)基因启动子驱动的绿色荧光蛋白基因载体pBSK-SAG１/５UTR-eGFP-SAG１/３UTR(pBSK-SAG１/GFP)，然后构建以弓形虫热休克蛋白HSP７０基因启动子驱动的反向重复序列RNAi载体pBSK-HSP７０/５UTR-IntronC-HSP７０/３UTR，将载体pBSK-SAG１/GFP中的SAG１/５UTR-eGFP-SAG１/３UTR片段克隆到载体pBSK-HSP７０/５UTR-IntronC-HSP７０/３UTR中形成载体pBSK-GFP-Hairpin，再将该载体中的GFP-Hairpin片段克隆到载体pHANA-０。５中形成弓形虫可遗传及可诱导的RNAi载体系统pHANA-hairpin。通过PCR分别扩增SAG１和缓殖子蛋白１(BAG１)基因的正向和反向序列，通过酶切连接，将正向和反向序列克隆到载体pHANA-hairpin中，分别构建靶向SAG１和BAG１基因的RNAi载体pHANA-hairpin/SAG１和pHANA-hairpin/BAG１。结果 酶切鉴定和测序结果表明成功构建载体pHANA-hairpin、pHANA-hairpin/SAG１和pHANA-hairpin/BAG１。结论 弓形虫可遗传及可诱导的RNAi载体系统成功构建，为下一步基因功能研究奠定基础。
关键词： 弓形虫 RNA干扰 反向遗传学 载体 速殖子
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