RNAi沉默氧糖剥夺预处理星形胶质细胞GDNF表达方法的建立

论文发布时间：[2010-01-18] 范文大全编辑：Voive.net

所有作者：李昕华莽靖何金婷邵延坤邢影徐忠信

作者单位：吉林大学中日联谊医院神经内科

论文摘要：目的：利用RNAi抑制星形胶质细胞 GDNF表达，观察转染效率和沉默效果。方法：大鼠皮层星形胶质细胞的培养及消化传代，构建及扩增GDNF基因沉默质粒pGenesil-１A和B，用Lipofectamine ２０００转染星形胶质细胞，４８h后，荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达，比较两段序列的转染效率；选取转染效率高的质粒和对照质粒pGenesil-１C分别转染星形胶质细胞，１２h后给予OGD预处理及再缺血，缺血再灌注后６h、１２h、２４h、４８h，采用RT-PCR检测GDNF mRNA表达观察沉默效果。结果：传代细胞生长很快，细胞形态与原代培养的星形胶质细胞无明显差别，长满至９０％且细胞生长状况良好时可用于转染； GDNF基因沉默对照组GDNF表达量显著高于正常对照组，基因沉默组在任一时间点GDNF mRNA表达均低于正常对照组和基因沉默对照组（p

关键词： RNAi 氧糖剥夺星形胶质细胞 GDNF

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