所有作者：郭芬 周天鸿
作者单位：广东药学院生命科学与生物制药学院
论文摘要：目的 构建同源异性框基因Rhox５的真核表达质粒，转染NIH３T３细胞，建立稳定过表达Rhox５的细胞系。 方法 PCR方法扩增Rhox５的全长cDNA序列，PCR产物双酶切后和人工合成的HA抗原表位标签共同克隆至pcDNA３。１（-）哺乳动物细胞表达载体中，构建pcDNA-Rhox５-HA融合表达质粒。脂质体法将经过测序成功的pcDNA-Rhox５-HA融合质粒和pcDNA３。１空载体分别转染NIH３T３细胞，潮霉素B筛选后建立阴性对照pcDNA３。１ in NIH３T３和稳定过表达Rhox５的Rhox５-HA in NIH３T３细胞系。RT-PCR和western blotting方法检测Rhox５-HA在稳定转染细胞系中的表达情况。 结果 成功构建了pcDNA-Rhox５-Myc重组质粒，获得稳定过表达Rhox５的NIH３T３细胞系。RT-PCR和Western blotting结果表明，构建的稳定细胞系中成功表达Rhox５-HA融合蛋白。 结论 Rhox５基因真核表达质粒的构建及其在NIH３T３细胞中的稳定表达为进一步体外研究Rhox５蛋白单独的功能及其与其他分子间功能性相互作用奠定了实验基础。
关键词： Rhox5 真核表达质粒 稳定转染细胞
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