所有作者：孙婷婷 高晓莲
作者单位：浙江理工大学生物工程所
论文摘要：荧光蛋白是一类起初存在于水母、水螅和珊瑚等腔肠动物体内的生物发光蛋白。它是由１１个β片层和１个包含发色基团的α螺旋构成的桶状结构，其只需O２的作用便可自身发光，而不需要借助其他任何外界因素。荧光蛋白性质稳定，在异源生物中表达无细胞毒性或者毒性很小，且因其片段较小（约７００ bp左右）易于和其他蛋白融合。融合后的荧光蛋白仍能保持荧光激发活性，所以其作为信标分子而在细胞学、医学和分子生物学领域中得到了广泛的应用。然而，随着荧光蛋白应用领域的扩展对荧光蛋白的种类也提出了更多的要求。而传统的获得荧光蛋白的方式主要局限于从生物体内直接提取或通过定点诱变和突变技术，利用基因合成的方法获得新型荧光蛋白的研究则很少。 本文基于微流体芯片合成获得新型荧光蛋白的基础上，构建真核质粒载体pcDNA３。１(+)-G２-hexaHis，通过转染进入HeLa细胞进行表达，结果显示G２在真核细胞中可以大量表达，且荧光强度很强，亚细胞定位结果显示荧光蛋白G２绝大部分存在于细胞质中，极少部分分布在细胞核中，故荧光蛋白G２可以成为真核细胞中蛋白定位、细胞骨架标记和细胞分裂、胞质蛋白表达强度等领域应用中很有潜力的工具。
关键词： 真核载体构建 转染 亚细胞定位
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