所有作者:费晶晶 张耀洲 金勇丰 李司
作者单位:浙江理工大学生物化学研究所
论文摘要:FKBPs是免疫抑制剂FK506的胞内受体蛋白,12 kD的FKBPs是其代表性成员,在各物种细胞内广泛表达且高度保守,具有PPIase活性。目前只是发现在脊椎动物中有多个FKBP12亚型,而我们通过NCBI家蚕基因库中检索到两条完整编码家蚕FKBP12蛋白的mRNA序列,命名为Bm-FKBP12A和Bm-FKBP12B,基因登录号分别为DQ443197和 DQ443423。多物种序列比对发现,FKBP12同源基因以及同源异性基因在氨基酸水平上具有高度的相似性。将两种FKBP12基因的cDNA序列与家蚕全基因组序列进行比对,发现两个基因都由3 个外显子和2个内含子组成。并对两个基因进行了启动子序列分析和染色体定位预测,发现两个基因都定位在20号染色体上。克隆,表达,纯化了Bm-FKBP12B蛋白,并制备了其多克隆抗体。通过相似EST搜索、荧光定量PCR和Western blotting分析了两个FKBP12蛋白在家蚕各个发育时期以及各个组织的分布。发现Bm-FKBP12A的转录本在各个组织均比Bm-FKBP12B高;Bm-FKBP12B的转录本在蛾期和胚胎期最高。Western blotting显示FKBP12在丝腺和肠的表达量最高,暗示在吐丝前期FKBP12蛋白可能对丝腺的基因表调控以及丝蛋白的形成具有重要作用。
关键词: 家蚕 FKBP12 表达分析 基因结构 启动子分析
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