家蚕BmCH基因的原核表达和亚细胞定位研究

论文发布时间：[2009-12-16] 范文大全编辑：Voive.net

所有作者：梁莉惠舒建洪张耀洲

作者单位：浙江理工大学生物化学研究所

论文摘要：从本实验室构建的家蚕蛹cDNA文库中筛选得到一条cDNA序列，经生物信息学分析发现其含有一个CHCH保守结构域，我们将其命名为BmCH(Genbank登录号为：ABF５１５１４。１)。该序列开放阅读框大小为４３５bp，编码１４４个氨基酸残基。成功构建重组质粒pET-２８a-BmCH，转化到大肠杆菌Rosetta(DE３)中用IPTG诱导表达该融合蛋白，用亲和层析的方法进行纯化，纯化后的融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。通过Western blot和荧光定量PCR的方法检测BmCH蛋白在家蚕四个发育时期和五龄幼虫多个组织中的转录水平和表达情况，发现该蛋白在卵、五龄幼虫、蛹、蛾四个发育时期均有表达，其中五龄幼虫中表达量最高；该蛋白在五龄幼虫的表皮、睾丸、肠、马氏管和卵巢中有明显表达，血、丝腺、脂肪表达量较少，但差异不大，气管和头中没有表达。和荧光定量PCR检测结果基本一致。利用抗体的免疫荧光标记对BmCH蛋白在家蚕BmN细胞中的定位进行研究，观察到荧光主要集中在细胞质中。本研究结果为进一步研究家蚕BmCH蛋白的结构和功能奠定基础。

关键词：家蚕 BmCH 细胞定位荧光定量PCR

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