所有作者:谭志文 吕正兵 孟凡国 张耀洲
作者单位:浙江理工大学生命科学学院生物化学研究所
论文摘要:为获得具有热稳定性的腺苷酸激酶,从极端嗜热菌Thermus thermophilic HB27 中克隆得到腺苷酸激酶基因,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达并获得了比较高的表达量。重组酶的最适pH是8。5,最适温度是90℃。重组酶对底物ADP的米氏常数Km是68。6 µ;mol/L, VmaxADP为0。294mmol/(L*min)。将该重组酶在70℃,80℃,90℃,100℃下分别作用7小时后,发现仍具有酶活性,显示出高的温度耐受性。同时我们报道了腺苷酸激酶的特异性抑制剂AP5A对重组腺苷酸激酶的抑制效率和抑制类型,发现2。0mmol/L的AP5A能够抑制重组腺苷酸激酶70%的酶活性,AP5A对重组腺苷酸激酶的抑制类型为竞争性抑制,其抑制常数为46。39umol/L。
关键词: 腺苷酸激酶 Thermus thermophilic HB27 表达 纯化 酶学性质
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