家蚕新基因Bm29的表达分析和亚细胞定位研究

论文发布时间：[2009-12-14] 范文大全编辑：Voive.net

所有作者：汲生芝霍锦霞于威吴祥甫张耀洲

作者单位：浙江理工大学生命科学学院

论文摘要：我们从本实验室构建的家蚕蛹cDNA文库中克隆到一条家蚕基因（GenBank登录号：DQ９８５５９９）。该基因序列全长８１９ bp，编码２７２个氨基酸残基。在NCBI上经BLAST对该序列进行同源性比对后初步确定其为家蚕中的未知基因，只与鳞翅目的罗奴霉素毛虫（Lonomia obliqua caterpillars）中的假定蛋白２９有５７％的相似性，所以将该基因命名为Bm２９（Bombyx-mori２９）。将Bm２９插入原核表达载体pET-２８a(+)构建重组质粒，然后在大肠杆菌Rosetta中表达该融合蛋白并利用离子交换层析和亲和层析进行纯化，用纯化的蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体。另外，通过实时荧光定量PCR和荧光Western blotting的方法，我们发现Bm２９在家蚕各时期以及五龄幼虫各组织中的转录和表达水平存在较大差异。实时荧光定量PCR结果显示：在家蚕各发育时期中，蛹中RNA含量最高；五龄幼虫组织中马氏管、卵巢和头中Bm２９含量最高最高，脂肪体最低。Western blotting结果表明：在家蚕的不同发育时期，蛹中蛋白表达量最高，五龄幼虫各组织中，马氏管、头以及丝腺中Bm２９表达量较高，中肠和脂肪体中含量最低。以家蚕BmN细胞进行免疫细胞化学实验，结果显示，Bm２９蛋白主要分布在细胞质和细胞膜周围。以上的研究结果为深入研究家蚕新基因Bm２９的功能奠定了基础。

关键词：家蚕 Bm29 多克隆抗体 RT-PCR Western blotting 亚细胞定位

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