所有作者：李婷婷 陈健 张耀洲
作者单位：浙江理工大学生命科学院生物化学研究所
论文摘要：从本实验室构建的家蚕蛹cDNA文库中[２]获得一条４３８ bp的基因序列（基因登号：：EU８２６６７６），序列比对后推测它是NDUF-b５家族的一个亚基，将其命名为BmNADHb５，可能与糖酵解和细胞呼吸作用中的柠檬酸循环有密切关系。在E。coli Rosetta中过度表达重组的BmNADHb５。采用亲和层析的方法纯化融合蛋白BmNADHb５，并用BmNADHb５蛋白免疫雄新西兰大白兔，进行多克隆抗体制备。间接 ELISA 法检测效价在１：１２８００ 以上，用ELISA半定量法和Western blot检测抗体在各组织和各时期的表达。五龄幼虫的各组织器官的转录水平在气管中表达量最高，而在丝腺中最低。在家蚕的不同发育时期中，转录水平最高为卵期，而蛾则最低。同时利用免疫荧光PCR技术检测该基因在家蚕不同发育时期和五龄幼虫不同组织器官的转录水平，显示它在不同发育时期和五龄幼虫不同组织器官中均有转录。亚细胞定位，BmNADHb５存在于细胞质中，推测可能包括细胞质中线粒体等细胞器的质膜。
关键词： ELISA Western blot 荧光定量PCR 亚细胞定位
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