所有作者：李佩 解纯刚 张耀洲
作者单位：浙江理工大学生命科学学院
论文摘要：Stathmin蛋白具有高度的保守结构域SLD（stathmin-like-domain）结构域，是真核生物中一种小分子的磷蛋白。本研究从家蚕cDNA文库中得到一条编码Stathmin蛋白的基因，把该基因命名为BmSTMN，GenBank登录号为NM００１０４６７５０。该基因开放阅读框为８７６ bp，编码２９１个氨基酸。同源性比较表明该基因编码蛋白质的氨基酸序列与赤拟谷盗（Tribo-lium castaneum，鞘翅目）的同源性最高为５０％。将BmSTMN基因片段与pET-２８a(+)表达载体连接，构建重组质粒，转化大肠杆菌Rosetta(DE３)并诱导表达后，利用亲和层析的方法纯化融合蛋白。将纯化的融合蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体，间接ELISA法检测效价在１：１２８００以上，Western blotting 检测抗体特异性良好。利用实时荧光定量PCR方法和Western blotting技术对家蚕卵、五龄幼虫、蛹、蛾各发育时期，以及五龄幼虫各组织中的靶mRNA的量进行比较。实验结果表明，BmSTMN在所检测家蚕的各发育时期及各组织中有不同程度的表达，其中在蛹、头和生殖器中的表达量较高。通过亚细胞定位发现该蛋白主要出现在细胞膜附近。本研究为进一步探讨BmSTMN基因在家蚕生长、分化及发育过程中的生物学功能奠定了良好的基础。
关键词： 家蚕 BmSTMN 蛋白表达 Western blotting 实时荧光定量PCR 亚细胞定位
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