所有作者：郑碧 梁丹军 陈剑清 张耀洲
作者单位：浙江理工大学生命科学学院生物化学研究所
论文摘要：小热休克蛋白(small heat shock protein， sHSP)是一类受热处理后诱导产生的蛋白家族。我们从本实验室构建的家蚕蛹cDNA 文库中获得了一条序列，全长８４１ bp，其开放式阅读框(ORF)长度为５９７ bp，编码１９８个氨基酸残基，包含一个高度保守的α-crystallin 结构域。将该ORF序列与pET-２８a(+)载体进行连接，构建重组质粒，转化到BL２１ Star(DE３)，经１ mM IPTG诱导表达后，采用亲和层析的方法纯化重组蛋白。将纯化后的融合蛋白免疫新西兰兔获得多克隆抗体。Western blot分析家蚕各发育时期和五龄幼虫各组织中BmHSP２２。６的分布，发现BmHSP２２。６蛋白在家蚕蛾时期和五龄幼虫的头、表皮中表达量最高。经热激处理后，BmHSP２２。６蛋白在吐丝期幼虫和蛹的表达量有显著变化。细胞免疫荧光实验结果表明，BmHSP２２。６蛋白存在于家蚕卵巢细胞BmN的细胞质中，经热激处理后，表达量显著上升。这些结果为细胞抵抗环境压力(比如热刺激)的保护机制提供了很好的解释。研究BmHSP２２。６对溶菌酶聚集的影响时，发现不同浓度BmHSP２２。６在不同程度上抑制了溶菌酶聚集，说明其具有分子伴侣功能。
关键词： 家蚕 小热休克蛋白22.6 多克隆抗体 热激 分子伴侣
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