家蚕Wibg基因的表达与定位分析

论文发布时间：[2009-12-16] 范文大全编辑：Voive.net

所有作者：李春凤张耀洲

作者单位：浙江理工大学生物化学研究所

论文摘要：从家蚕基因库中获得BmWibg基因，该基因含有一个５８２ bp的ORF框，编码１９３个氨基酸残基，含有一个Mago-bind superfamily的保守结构域，该超家族蛋白通过广泛的静电相互作用与Mago的α 螺旋结合，可能是Mago蛋白的伴侣蛋白。我们把BmWibg插入原核表达载体pET-２８a(+)构建重组质粒，然后在大肠杆菌BL２１(DE３)中表达该融合蛋白并进一步纯化，利用纯化蛋白免疫新西兰兔获得抗体，用Protein A HP凝胶柱纯化抗体。同时利用荧光定量PCR技术，Western blotting检测该基因在家蚕不同发育时期和不同组织的转录水平和表达水平，结果显示存在较大差异，卵期和精巢最高，蛾期和气管最低。同时，我们还对BmWibg蛋白进行了亚细胞定位，发现其分布在BmN细胞的细胞质中。根据本实验的结果，我们推测BmWibg可能在家蚕的早期生殖发育过程中起重要作用，但是具体功能还有待于进一步的实验去证明。

关键词： BmWibg 原核表达荧光定量PCR Western blotting 亚细胞定位

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