所有作者：李程鹏 赵辅昆 谷明波 王琦 温高田 吴业卿 丁明
作者单位：浙江理工大学生命科学院分子酶学与蛋白质组学实验室
论文摘要：随着肿瘤干细胞概念的提出，以及实体瘤中肿瘤干细胞的成功分离，人们越来越确信肿瘤干细胞是肿瘤的生长，恶化和转移的内在原因。本实验室已经利用乳腺癌细胞系MCF-７在体外培养出了乳腺癌肿瘤干细胞mammosphere，并利用蛋白质组学技术发现GIPC１（G-protein signaling-GAIP- interacting protein COOH terminus）蛋白在mammosphere 中上调表达。为了研究GIPC１蛋白对于mammosphere形态及生长的影响以及其对于乳腺癌细胞系MCF-７细胞系的增殖和迁移所起的作用，实验利用慢病毒介导的RNA干扰技术使GIPC１蛋白低表达，通过mammosphere培养观察GIPC１的干扰对于mammosphere的形态及生长的影响，通过蛋白质组学技术研究GIPC１蛋白低表达对于MCF-７细胞蛋白表达的影响。 实验成功构建GIPC１低表达细胞株(GIPC１-i２)，并通过荧光显微镜观察和免疫印迹证实其低表达。对稳定低表达细胞株及阴性对照细胞株进行mammosphere培养，结果表明单纯的GIPC１低表达对mammosphere的形态及生长并没有造成明显的影响。实验进一步对低表达细胞株及阴性对照细胞株进行了差异蛋白质组学分析，找出１６个差异表达蛋白，利用MALDI-TOF-TOF质谱鉴定出其中１２个蛋白；９个在低表达细胞株中高表达，３个低表达，并对其功能进行分类：一类是与细胞骨架、糖代谢、核苷酸代谢以及线粒体分裂相关蛋白，影响细胞的增殖和迁移。另一类与干细胞的形成密切相关，包括信号转导蛋白和干细胞分子标记蛋白。
关键词： 乳腺癌 mammosphere GIPC1 RNA干扰 蛋白质组学
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