所有作者：刘静 张耀洲
作者单位：浙江理工大学生化研究所
论文摘要：ycaCR蛋白含有一个保守的ycaC-related结构域，属于异分支酸酶超家族；据推测其功能可能与异分枝酸酶类似，但是具体底物和生物学功能尚不清楚。从本实验室构建的家蚕蛹cDNA文库中检索到一个EST序列，该序列编码一个含有ycaC-related保守结构域的蛋白，进而得到该cDNA的全长序列。该序列被命名为BmycaCR，GenBank登录号为GU２９２７９４。本文通过基因克隆、原核表达和纯化技术得到BmycaCR蛋白，用纯化的蛋白为抗原免疫新西兰大白兔，制备了该蛋白的多克隆抗体。Western blot 检测结果发现BmycaCR蛋白在家蚕的各个发育时期中，卵时期的表达量明显高于其他时期；在五龄幼虫的各组织中，该蛋白在睾丸、马氏管、气管、卵巢、表皮、肠和脂肪体中均有表达，而在头部、血和丝腺中没有检测到阳性信号。荧光定量PCR结果显示，在家蚕各发育时期，BmycaCR 基因在卵的转录水平明显高于其他发育时期；在家蚕五龄幼虫各组织中，BmycaCR基因的转录水平由高到低依次为睾丸、气管、脂肪体、卵巢、表皮、肠、血、马氏管、丝腺和头部。亚细胞定位表明BmycaCR蛋白在细胞核和细胞质中均有分布，并在靠近质膜区域有强的荧光信号。本研究结果为以后研究该蛋白的功能特性奠定了基础。
关键词： 家蚕 BmycaCR 实时荧光定量PCR 亚细胞定位
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