所有作者：赵燕 童富淡 李司 王丹 陈剑清 全滟平 张耀洲
作者单位：浙江理工大学生物化学研究所
论文摘要：我们以本实验室家蚕蛹cDNA为模板，克隆得到BmHMGA ORF全长，将其插入表达载体pET-２８a(+)，构建重组质粒并在BL２１star (DE３)中获得正确表达的融合蛋白His-BmHMGA，该融合蛋白主要以可溶性形式存在。用Ni-NTA柱亲和层析纯化融合蛋白，作为抗原免疫新西兰兔，获得多克隆抗体。抗体效价在１：１２８００以上，且具有较高特异性。提取家蚕四个时期及五龄幼虫各组织RNA，利用实时相对定量PCR检测BmHMGA在转录水平上差异。结果表明，基因BmHMGA在家蚕发育过程从卵到蛾，转录水平依次下降。在五龄幼虫期，BmHMGA基因在头，表皮，卵巢、睾丸、脂肪体、气管、马氏管、丝腺、中肠中的转录水平从高到低分布。提取对应时期及组织总蛋白，进行western blotting 和ELISA半定量分析。结果显示，BmHMGA蛋白在家蚕卵中含量最高，蛾中最低；在五龄幼虫的头BmHMGA蛋白含量明显高于其他组织，在中肠，马氏管中则没有明显的信号。这和RT-PCR的实验结果相吻合。ELISA半定量分析结果再次验证了这种分布情况。以家蚕BmN细胞进行免疫细胞化学实验，结果显示，BmHMGA蛋白在仅细胞质中均匀分布。这些结果为深入研究家蚕BmHMGA基因的功能奠定了基础。
关键词： BmHMGA基因 Western blotting RT-PCR 细胞免疫化学
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