家蚕CIB基因的表达分析及其亚细胞定位

论文发布时间：[2009-11-24] 范文大全编辑：Voive.net

所有作者：李晓璐杨光郑青亮张耀洲

作者单位：浙江理工大学生物化学研究所

论文摘要：钙整合素结合蛋白一般含有４个EF-hand结构域，可与包括血小板αⅡbβ３ integrin 等许多效应蛋白结合并能调节他们的功能。我们从本实验室构建的家蚕蛹cDNA文库中获得一条cDNA序列，通过同源序列比对后发现其为家蚕钙整合素结合蛋白 (Bombyx mori calcium and integrin binding protein，BmCIB)基因，全长为９３９ bp，ORF为５５８ bp，编码１６５个氨基酸。我们构建了重组表达载体pET２８a- BmCIB，在E。 coli BL２１(DE３)中诱导表达了含有His标签的融合蛋白BmCIB。通过包涵体纯化与亲和层析法进一步纯化融合蛋白并免疫雄性新西兰兔，制备并获得了多克隆抗体。通过实时定量PCR和Western blot分析，我们发现BmCIB 的mRNA和表达的蛋白在五龄家蚕各组织及发育时期广泛分布。其mRNA转录水平以生殖腺和蛹期中最高，蛋白表达在各发育时期均可检测到，各组织中以生殖腺中最多。通过免疫荧光法分析BmCIB蛋白在家蚕Bm５细胞的亚细胞定位，发现其定位于细胞质中。以上工作为进一步研究BmCIB功能奠定了基础。

关键词：钙整合素结合蛋白 CIB 原核表达实时定量PCR 亚细胞定位

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