所有作者：韩剑秋 李增鹏 于威 张耀洲
作者单位：浙江理工大学生物化学研究所
论文摘要：我们通过RT-PCR的方法从家蚕蛹cDNA文库中获得一条cDNA序列，在NCBI的Genbank数据库中进行比对，结果在序列和结构上与其他物种的真核细胞翻译起始因子４E基因具有较高的相似性，推测可能是家蚕eIF４E蛋白基因，我们把这一cDNA序列命名为BmeIF４E（Bombyx mori eukaryotic translation initiation factor ４E）基因，GenBank登录号为DN４４３１９２。为初步研究BmeIF４E的功能，将该基因克隆到表达载体pET-２８a(+)中，构建原核表达质粒pET-２８a(+)-BmeIF４E，转化感受态细胞BL２１(DE３)，IPTG诱导表达并纯化该重组蛋白，制备多克隆抗体。家蚕Bm５细胞进行亚细胞定位研究结果表明BmeIF４E既存在于细胞质中也存在于细胞核中。荧光定量PCR和Western blot分析结果表明在不同组织及发育时期该基因的表达有差异，在各组织中BmeIF４E表达量从高到底依次是马氏管、表皮、脂肪体、气管、卵巢、中肠、头和丝腺；在卵、幼虫、蛹和蛾四个发育时期中，蛾中的表达量最高，其次是蛹，再次是五龄幼虫，而在卵中几乎没有检测到该蛋白。从以上试验结果可以看出，BmeIF４E作为一种重要的管家基因，在家蚕的整个生命周期中均起着非常重要的作用。
关键词： 家蚕 真核翻译起始因子4E 原核表达 亚细胞定位 实时荧光定量PCR
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