家蚕Y-Box蛋白的克隆表达以及功能分析

论文发布时间：[2009-11-17] 范文大全编辑：Voive.net

所有作者：杨光李晓璐盛清张耀洲

作者单位：杭州浙江理工大学生物化学研究所

论文摘要：Y-box蛋白具有高度保守的结构域csd（cold shock domain），是真核生物中的冷休克蛋白。我们通过RT-PCR的方法从家蚕蛹中扩增到家蚕Y-box蛋白基因的完整的ORF序列，并将其命名为Bombyx Y-box（BYB）基因，GenBank登录号为AB０９８５３７。１。通过将扩增到的BYB基因克隆到融合表达载体pET-２８a相应的酶切位点上，得到重组表达质粒pET-２８a-BYB，将该重组载体转化大肠杆菌BL２１(DE３)，诱导表达后，以亲和层析的方法纯化目的蛋白His-BYB。将纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体， ELISA检测效价大于１∶１２８００。采用实时荧光定量PCR方法和免疫印迹方法（Western blotting）对家４个发育时期以及５龄幼虫各组织中BYB的mRNA转录水平和BYB蛋白进行检测。应用免疫细胞化学技术对家蚕Bm５细胞进行亚细胞定位分析，发现BYB蛋白在整个细胞周期主要分布于细胞质中，但在４℃冷激２h后，BYB蛋白则同时位于细胞核和细胞质内。推测BYB蛋白在冷激情况下向细胞核内迁移，并对某基因产生调控作用，从而表达相应的应激性蛋白。

关键词：家蚕 BYB基因原核表达时荧光定量PCR 亚细胞定位

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