家蚕未知基因Bm-P312的克隆表达及定位研究

论文发布时间：[2009-11-10] 范文大全编辑：Voive.net

所有作者：甄凯旋郑青亮张耀洲

作者单位：浙江理工大学生物化学研究所

论文摘要：从本实验室构建的家蚕蛹cDNA文库中筛选获得一条阅读框为８７０bp，编码２８９个氨基酸的基因，GenBank登陆号为：DN２３７５６０，在NCBI上对该序列进行同源性比对后初步确定其为家蚕中的一未知基因，并命名为Bm-P３１２（Bombyx mori-P３１２）。我们根据开放阅读框设计上下游引物，PCR扩增目的基因，构建pET-２８a-Bm-p３１２重组质粒，转入大肠杆菌BL２１(DE３)中IPTG诱导表达该融合蛋白并进行纯化，免疫新西兰兔制备多克隆抗体。以家蚕Bm５细胞进行免疫细胞化学实验，结果显示，Bm-P３１２蛋白均主要分布在细胞质中。利用荧光定量PCR的方法，对家蚕卵、五龄幼虫、蛹、蛾四个发育时期，以及五龄幼虫各组织中Bm-P３１２的mRNA转录水平进行比较，分析发现在蛹期和生殖腺、头部中转录水平较高。提取家蚕卵、五龄幼虫、蛹、蛾四个发育时期及五龄幼虫各组织的总蛋白，进行免疫印迹实验，结果显示，Bm-P３１２蛋白在家蚕的蛹期以及生殖腺、头部、丝腺中均有明显表达，转录和表达情况相对比较一致。我们推测Bm-p３１２可能在家蚕的生殖发育过程中发挥一定作用，对Bm-P３１２蛋白功能的了解还待深入研究。

关键词：家蚕 Bm-P312基因荧光定量PCR 组织定位亚细胞定位

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