家蚕translin蛋白的初步研究

论文发布时间：[2009-11-24] 范文大全编辑：Voive.net

所有作者：武慧兰舒特俊张耀洲

作者单位：浙江理工大学生物化学研究所

论文摘要：Translin是一种与DNA/RNA相结合，在细胞内发挥多种生物学功能的一种蛋白，分子量大约２７KD左右，进化保守。本实验从家蚕蛹的cDNA文库中扩增到一条ORF长度为７０８bp的基因序列，经NCBI中BLAST比对将其命名为BmTLP(for translin-like protein from Bombyx mori)。然后将扩增到的BmTLP融合到表达载体pET-２８a相应的酶切位点上，得到融合蛋白表达质粒pET-２８a-BmTLP，再将该重组子转化到大肠杆菌BL２１(DE３)进行表达。然后对表达的蛋白进行纯化。经FPLC反相柱层析进一步纯化后，再进行质谱分析证实该蛋白表达的正确性。以纯化所得蛋白为抗原免疫雄性新西兰兔，制备了该重组蛋白的多克隆抗体，之后用ELISA检测该抗体的效价。为了解该蛋白在家蚕中各时期及各组织中的分布，做了western blotting和RT-PCR相关实验，结果显示五龄幼虫的各组织器官转录表达在肠和睾丸中较多，说明该蛋白可能与家蚕的生殖发育有关，而在家蚕的不同发育时期中，转录表达水平最高为蛹期，而卵期则最低。

关键词：家蚕 translin 原核表达 RT-PCR western blotting

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