家蚕ras oncogene（Bras2）的表达、纯化和特性分析

论文发布时间：[2009-10-27] 范文大全编辑：Voive.net

所有作者：庄文华张学芳吕正兵张耀洲

作者单位：浙江理工大学生物化学研究所

论文摘要：Ras原癌基因家族包括K-Ras、H-Ras、N-Ras、R-Ras亚家族，家蚕ras oncogene(Bras２)基因含有一个M-Ras/R-Ras-like的保守结构域。BmBras２基因的mRNA序列全长为１４１２bp，开放阅读框（ORF）为６０３bp，编码２００个氨基酸残基。我们将BmBras２的ORF克隆到原核表达载体pET-２８a中，构建重组质粒后转化大肠杆菌Rosetta(DE３)，经IPTG诱导，带有His标签的重组蛋白rBmBras２得以成功表达。表达的rBmBras２部分以可溶形式存在，经过镍柱亲和纯化后，以纯化的重组蛋白为抗原，免疫雄性新西兰大白兔获得该蛋白的多克隆抗体。在蛋白水平和mRNA转录水平对BmBras２的表达进行分析，Western blot和荧光定量PCR的结果说明BmBras２蛋白在四个发育时期都有表达，并且在蛹中的表达量最高，在五龄幼虫、蛾和卵中的表达量相对较低；在家蚕的八个组织中也都有表达，在头、肠和表皮中的表达量相对较高。用免疫荧光技术对BmBras２进行亚细胞定位，发现其主要定位在Bm５（家蚕卵巢上皮细胞）的细胞核中，部分定位于细胞质中而不存在于膜上。相关的细胞增殖实验结果显示BmBras２能促进肝癌细胞PLC及HepG２的增殖。研究结果为我们进一步研究BmBras２蛋白的相关功能奠定了一定的基础。

关键词：家蚕 Ras oncogene(Bras2) 表达分析亚细胞定位细胞增殖

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