猪结合珠蛋白的基因克隆、原核表达及单克隆抗体制备

论文发布时间：[2009-10-03] 范文大全编辑：Voive.net

所有作者：喻翠翠孟宪荣栗绍文梅仕林张望周蕾蕾陈辉毕丁仁

作者单位：华中农业大学动物医学院预防兽医学湖北省重点实验室

论文摘要：本研究的目的在于利用重组猪结合珠蛋白（Haptoglobin，Hp）制备特异性单克隆抗体。方法是以梅山猪肝脏总RNA为模板，利用RT-PCR方法扩增猪hp基因，将其克隆到原核表达载体pGEX-KG和pET-３２a上，转化至E。 coli BL２１中，IPTG诱导下高效表达重组GST-Hp和HIS-Hp蛋白。用纯化的重组GST-Hp免疫BALB/c小鼠，用纯化的HIS-Hp作为包被抗原进行间接ELISA检测，通过淋巴细胞杂交瘤技术筛选阳性细胞株，制备单克隆抗体。结果表明筛选到２株高效分泌抗猪Hp单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为３B４和３C８。Western-blot和间接ELISA检测均表明制备的单克隆抗体具有良好的特异性。

关键词：猪结合珠蛋白基因克隆原核表达单克隆抗体

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