所有作者:徐世晓 谭彬 李鼎立 郭文武
作者单位:华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室
论文摘要:绿色荧光蛋白基因(gfp)是转基因研究的热门工具之一。柑橘遗传转化中,可以根据GFP的表达,在早期对转化子进行鉴定,同时可在活体细胞中监测外源基因的表达情况。利用融合蛋白技术,将线粒体上特有的蛋白质靶定位序列(细胞色素氧化酶IV)与GFP相连,构建融合基因,将之转入细胞后,该细胞内的线粒体即可带上GFP标记。本研究以柑橘胚性愈伤组织为外植体,用根癌农杆菌介导法进行m-gfp4-coxIV融合基因的转化,共获得来自不同转化事件的细胞系24个,其中国庆1号温州蜜柑13个,伏令夏橙11个。国庆1号转m-gfp4-coxIV基因的愈伤组织荧光表达强且稳定,已用于本课题组细胞融合过程中双亲线粒体互作的动态研究。伏令夏橙转基因愈伤组织经胚胎发生途径诱导生芽、生根或嫁接成为完整植株。同时,通过激光共聚焦显微镜观察比较定位线粒体(Mt-GFP)、内质网(Er-GFP)及细胞质(Cy-GFP)三种不同亚细胞定位的GFP在叶片、茎、根中的表达差异,表明不同亚细胞定位的GFP表达差异显著,其表达部位特点与GFP融合基因构建目的完全吻合,细胞质内表达的Cy-GFP荧光强度明显强于定位线粒体Mt-GFP或内质网Er-GFP的荧光强度。
关键词: 绿色荧光蛋白 根癌农杆菌介导转化 亚细胞定位 激光共聚焦显微术
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