家蚕ICAD基因的克隆、表达及功能研究

论文发布时间：[2009-10-15] 范文大全编辑：Voive.net

所有作者：马月于威张耀洲

作者单位：浙江理工大学生命科学学院

论文摘要：ICAD(DREP-１) 基因在细胞凋亡过程具有重要的作用。本研究通过RT-PCR的方法获得的BmICAD基因的cDNA序列全长８４４ bp，含有一个５２２ bp的ORF，编码１７４个氨基酸残基。将BmICAD基因片段与pET-２８a(+)表达载体连接，构建重组质粒，转化大肠杆菌BL２１，IPTG低温诱导(２５℃)表达后，利用亲和层析的方法纯化重组融合蛋白。将纯化的融合蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体，通过亚细胞定位发现该蛋白主要存在于细胞质中。通过RNAi实验，MTT检测表明BmICAD基因被干扰则增加细胞凋亡， BmICAD具有抑制细胞凋亡的作用。在蛋白的相互作用研究中，发现BmICAD与两个蛋白因子—家蚕的DNA超螺旋因子(DNA supercoiling factor，SCF)和家蚕的富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白（secreted protein acidic and rich in cysteine，SPARC）相互作用。

关键词： BmICAD 家蚕亚细胞定位 RNAi 蛋白相互作用

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