所有作者：李莹莹 万琳 杨浩 刘珊 蔡华伟 卢晓风
作者单位：四川大学 华西医院 卫生部移植工程和移植免疫重点实验室，四川大学生命科学学院
论文摘要：TRAIL是肿瘤坏死因子TNF家族员，对肿瘤细胞具有高效和选择性杀伤活性，可能发展为新型抗肿瘤药物。基因重组表达是生产蛋白药物的重要手段。本文首先通过PCR扩增获得人可溶性TRAIL（１１４-２８１氨基酸组成的片段）基因，然后将其插入毕赤酵母表达载体pPIC９K中进行表达。结果发现，经G４１８筛选获得的高拷贝转化子，在含有３ ％甲醇的BMMY培养基中，人可溶性TRAIL获得高效分泌表达。表达产物经Ni-Agarose 亲和层析，纯度大约为８０％，产量可达１-２ mg/L。细胞毒性实验表明，０。０５ µ；g/ml可溶性TRAIL就对白血病细胞Jurkat显示很强的杀伤活性，细胞存活率只有１０％。TRAIL从０。１ µ；g/ml就对人肺癌细胞A５４９显示剂量依赖的杀伤作用。当浓度达到１ µ；g/ml时，细胞存活率大约为３０％。而在测试的浓度范围内，可溶性TRAIL对人皮肤成纤维细胞HSF均无明显细胞毒作用，表明毕赤酵母表达的人可溶性TRAIL对肿瘤细胞的杀伤有选择性。该表达体系的建立，为进一步利用毕赤酵母大量生产人可溶性TRAIL及基于人可溶性TRAIL的新型融合蛋白奠定了基础。
关键词： TRAIL 细胞凋亡 肿瘤治疗 毕赤酵母
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